LE DIAGNOSTIC VIROLOGIQUE 

I- INTRODUCTION :

Le diagnostic viral est long, fastidieux et coûteux. Il est réservé aux grands centres à grands moyens. Dans les petits laboratoires, le diagnostic viral est essentiellement indirect. Ce diagnostic peut être intéressant dans plusieurs domaines tels la recherche scientifique, l’épidémiologie et dans certains cas pour connaître le pronostic d’une maladie.

II-DIAGNOSTIC DIRECT : C’est l’isolement et l’identification du virus responsable d’une infection. A-Le prélèvement : 1-Les conditions de prélèvement :

• L’asepsie doit être rigoureuse.

• Le prélèvement doit être effectué le plus rapidement possible (Dés l’apparition des signes cliniques). 
  2-Le lieu de prélèvement : Il est guidé par la clinique et la pathogénie de l’infection (Grippe : Gorge, Rage : 
  Salive/LCR/Sang, Rota virus : Selles…). 
  

3- Fiche de renseignement : Chaque prélèvement doit être accompagné d’une fiche de renseignement contenant un minimum d’informations indispensables pour la conduite du diagnostic et pour son interprétation :

• Nom, prénom et age du malade.

• Site et nature du prélèvement.

• Signes cliniques et leur date d’apparition. 
  4-Différents types de prélèvement : Rhino-pharyngé, cutané, des selles, du LCR…etc. 
  

B- Le transport : Le prélèvement doit être transporté vers le laboratoire le plus rapidement possible. Sinon, il doit être conservé au froid (de –20 à +4°c) dans un milieu de transport adéquat. L’addition d’antibiotique évite la pullulation des bactéries.

C-La culture : Le virus est un micro-organisme parasite stricte, sa culture exige donc des systèmes vivants : 
1-Les animaux de laboratoire : Comme le singe, le lapin, la souris, le cobaye… 
2-L’œuf embryonné : Le prélèvement suspect est injecté dans la cavité amniotique ou allantoïque de l’œuf puis on 

surveille l’éventuelle apparition de lésions macro ou microscopiques.

3- La culture cellulaire : On utilise soit des cellules normales (qui supportent 2 à 50 trypsinisations) soit des cellules continues (cancéreuses). On choisi obligatoirement une cellule permissive et de préférence sensible. Le prélèvement est injecté dans le flacon contenant les cellules. Après un certain temps, on recherche une apparition éventuelle d’un ‘ECP’ (Effet CytoPathique) qui est différent en fonction des virus ou des familles de virus (Ex : Le virus de la poliomyélite : A l’état feuille, il donne des cellules arrondies réfringentes se détachent du support. Après coloration au MGG, il donne des cellules rondes contenant une inclusion éosinophile géante occupant la totalité du cytoplasme et refoulant le noyau vers la périphérie. Pour le virus de la rougeole, il donne des synticia et ce grâce à la protéine F).

D- L’identification : On utilise les méthodes immunologiques ; La RFC (Réaction de Fixation du Complément), l’agglutination et l’hémagglutination, l’immunofluorescence directe et indirecte, les méthodes enzymatiques (ELISA) et le dosage radio-immunologique.

E- L’interprétation.

III-DIAGNOSTIC INDIRECT : C’est le dosage des anticorps apparaissant lors d’une infection. A-Le prélèvement : On prélève le sang en fonction du but de la recherche (Un seul prélèvement ou 2 à 15 jours d’intervalle).

B-La recherche d’anticorps : Soit : 
1-Qualitative :Tel les anticorps antiVIH, antihépatite C… 
2-Quantitative à la recherche du seuil de positivité. 

Les 2 prélèvements doivent être manipulés en même temps et par la même personne.

On peut avoir 3 cas de figure : Î Résultats négatifs si les anticorps sont absents dans les 2 sérums. Î Résultats positifs et donc soit séroconversion si les anticorps sont présents dans le 2^e sérum et non dans le 1^er soit

une augmentation significative des anticorps (S2 = 4xS1 ou plus). 
Î On reconnaît la primo-infection par la recherche des IgM. Leur absence signe la réinfection.